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两个苹果酸酶的表达和酶学性质分析

【作者】李珊 杨晓霞 季秀玲 林连兵 魏云林 张琦

【关键词】 深黄被孢霉; 苹果酸酶; 基因克隆; 表达; 酶学性质分析;

摘要为了探讨深黄被孢霉M6-22中不同苹果酸酶的性质,研究从深黄被孢霉M6-22中克隆得到苹果酸酶MIME1基因并在大肠杆菌BL21中诱导表达,经镍柱纯化和酶活分析表明所纯化蛋白能催化苹果酸脱羧生成丙酮酸和NADPH,具有苹果酸酶的特性.同时与前期获得的MIME2进行酶学性质分析.结果显示,重组表达的MIME1和MIME2都具有苹果酸酶的性质,但MIME1的最适温度和最适pH分别为28℃和7.5,MIME2的最适温度和最适pH分别为30℃和5.8,而且在最适温度和最适pH条件下所纯化的MIME1和MIME2酶活分别为292.84 U/mg和235.14 U/mg.进一步酶学性质分析表明,Mg2+、Co2+、Cu2+、Zn 2+可以提高MIME1的活性,其中Cu2+激活作用最为明显,而EDTA、Ca2+、Mn2+对MIME1的活性则有抑制作用;Mn2+、Mg2+、Co2+和Ca2+对MIME2表现出不同程度的激活作用,其中Mn2+激活作用最为明显,而EDTA、Cu2+和Zn2+则对MIME2的酶活表现出明显的抑制作用.这些分析结果表明,同一种细胞中不同的苹果酸酶具有不同的酶学性质,这可能与它们执行不同的生物学功能有关.通过异源表达和分离纯化,研究初步揭示了2个深黄被孢霉M6-22苹果酸酶的一些酶学性质特点,这为以后深入研究该苹果酸酶结构和功能以及与M6-22菌株油脂积累的关系提供了理论依据和参考.

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